簡 介
1975年，porath等人提出了一種新的純化方法-固定化金屬鰲合層析，利用金屬離子（ni2+，cu2+等）與氨基酸表面的殘基（如*的咪唑基）的配位鰲合作用，來純化與金屬離子有親和作用的蛋白質(zhì)。
*標(biāo)簽由于分子量小，幾乎不干擾靶蛋白的功能、活性和結(jié)構(gòu)而被廣泛的使用。固定的金屬離子親和層析是純化*標(biāo)簽蛋白的常用方法。
*標(biāo)簽蛋白的純化工具
月旭ni親和填料ni tanrose 6ff（nta）
ni tanrose 6ff（nta）親和介質(zhì)是將金屬離子ni2+鰲合在以氨三乙酸為配基的6%高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠上形成的親和層析介質(zhì)。月旭科技研發(fā)的ni tanrose 6ff（nta）不僅純化純度較高，通過控制合理的ni離子密度，結(jié)合載量可達(dá)到～40mghis標(biāo)簽蛋白/ml介質(zhì)，可以用于各種表達(dá)來源（如大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞）的*標(biāo)簽（6xhis-tagged）蛋白的純化。nta含有四個螯合區(qū)，較一般的三齒螯合劑能更好的結(jié)合ni2+。6xhis可與ni2+螯合，從而使his標(biāo)簽蛋白結(jié)合在ni tanrose 6ff（nta）純化介質(zhì)上，未結(jié)合的蛋白被洗滌下去，結(jié)合在介質(zhì)上的蛋白經(jīng)過一定濃度的咪唑或低ph緩沖液被溫和的洗脫下來，從而得到高純度的目標(biāo)蛋白。具有載量高、選擇性好、易于再生、成本低等優(yōu)點。有了它，再也不用擔(dān)心完不成純化任務(wù)了。
precot ni 6ff（nta）是ni tanrose 6ff（nta）的1ml和5ml預(yù)裝柱，用來純化6xhis-tagged蛋白，可以使用注射器、蠕動泵，或者液相層析系統(tǒng)（例如akta或fplc）。
ni tanrose 6ff（nta）應(yīng)用案例
預(yù)裝柱：precot ni 6ff（nta） 5ml
樣品：含有his標(biāo)簽蛋白（大腸桿菌表達(dá)）
平衡液a：50mm tris-hcl，0.5m nacl,20mm咪唑ph8.0
洗脫液b：50mm tris-hcl，0.5m nacl，0.5m 咪唑，ph8.0
流速：平衡、洗脫-1.0ml/min上樣-0.5ml/min
precot ni 6ff（nta）純化his標(biāo)簽蛋白的純化色譜圖
1：原液
2：流穿
3：洗脫（100%b）
4：原液
5：流穿
6：洗脫（100%b）
備注：1-3（樣品和平衡液中不含咪唑）；4-6（樣品和平衡液中含20mm咪唑）
由于宿主蛋白中也存在*和/或半*氨基酸殘基，其他的非特異性蛋白與靶蛋白一起與金屬離子親和層析填料結(jié)合，造成純化樣品純度不高。提高樣品中的咪唑濃度，*標(biāo)簽蛋白通過ni tanrose 6ff（nta），可以一步純化得到85%以上純度的純化樣品。